Kanuni na Mbinu za Uchambuzi wa Kiasi na Chromatography ya Kioevu

Utaratibu wa kujitenga wa kromatografia ya kioevu inategemea tofauti katika mshikamano wa vipengele katika mchanganyiko kwa awamu mbili.

Kulingana na awamu tofauti za kusimama, kromatografia ya kioevu imegawanywa katika kromatografia ya kioevu-imara, kromatografia ya kioevu-kioevu na kromatografia ya awamu iliyounganishwa.Inayotumika zaidi ni kromatografia-imara ya kioevu na jeli ya silika kama kichungi na kromatografia ya awamu iliyounganishwa na mikrosilika kama tumbo.

Kulingana na aina ya awamu ya kusimama, kromatografia ya kioevu inaweza kugawanywa katika kromatografia ya safu, chromatography ya karatasi na kromatografia ya safu nyembamba.Kulingana na uwezo wa utangazaji, inaweza kugawanywa katika kromatografia ya adsorption, chromatography ya kizigeu, kromatografia ya kubadilishana ioni na kromatografia ya upenyezaji wa gel.

Katika miaka ya hivi majuzi, mfumo wa mtiririko wa kioevu wa shinikizo la juu umeongezwa kwenye mfumo wa kromatografia ya safu wima ya kioevu ili kufanya awamu ya rununu itiririke haraka chini ya shinikizo kubwa ili kuboresha athari ya utengano, kwa hivyo ufanisi wa juu (pia hujulikana kama kromatografia ya kioevu ya shinikizo la juu). imeibuka.

SEHEMU
01 Kanuni ya Uchambuzi wa Kiasi wa Chromatography ya Kioevu

Ili kuhesabu kwa msingi wa ubora, vitu safi vinahitajika kama viwango;

Ukadiriaji wa kromatografia ya kioevu ni mbinu ya kiasi: yaani, kiasi cha uchanganuzi katika mchanganyiko kinakadiriwa kutoka kwa kiasi kinachojulikana cha sampuli safi ya kawaida.

SEHEMU
02 Misingi ya Ukadiriaji kwa kutumia Kromatografia ya Kioevu

Kiasi cha kipengele kilichopimwa (W) kinalingana na thamani ya majibu (A) (urefu wa kilele au eneo la kilele), W=f×A.

Kipengele cha kusahihisha kiasi (f): Ni uwiano usiobadilika wa fomula ya hesabu ya kiasi, na maana yake halisi ni kiasi cha kipengele kilichopimwa kinachowakilishwa na thamani ya jibu la kitengo (eneo la kilele).

Kipengele cha kusahihisha kiasi kinaweza kupatikana kutoka kwa kiasi kinachojulikana cha sampuli ya kawaida na thamani yake ya majibu.

Pima thamani ya majibu ya sehemu isiyojulikana, na kiasi cha sehemu kinaweza kupatikana kwa sababu ya kurekebisha kiasi.

SEHEMU
03 Maneno ya kawaida katika uchanganuzi wa kiasi

Sampuli (sampuli): suluhu iliyo na uchanganuzi wa kromatografia.Imegawanywa katika sampuli za kawaida na zisizojulikana.

Kawaida: Bidhaa safi yenye mkusanyiko unaojulikana.Sampuli isiyojulikana (haijulikani): Mchanganyiko ambao ukolezi wake unapaswa kujaribiwa.

Uzito wa sampuli: Uzani wa asili wa sampuli ya kujaribiwa.

Dilution: Kipengele cha dilution cha sampuli isiyojulikana.

Kipengele : kilele cha kromatografia cha kuchanganuliwa kwa kiasi, yaani, mchanganuzi ambaye maudhui yake hayajulikani.

Kiasi cha sehemu (kiasi): maudhui (au mkusanyiko) wa dutu inayojaribiwa.

Uadilifu : Mchakato wa kimahesabu wa kupima eneo la kilele cha kilele cha kromatografia kwa kutumia kompyuta.

Mviringo wa urekebishaji: Mviringo wa mstari wa maudhui ya kijenzi dhidi ya thamani ya majibu, iliyoanzishwa kutokana na kiasi kinachojulikana cha dutu ya kawaida, inayotumiwa kubainisha maudhui yasiyojulikana ya kichanganuzi.

SEHEMU
04 Uchambuzi wa Kiasi wa Chromatography ya Kioevu

1. Chagua mbinu ya kromatografia inayofaa kwa uchanganuzi wa kiasi:

l Thibitisha kilele cha sehemu iliyotambuliwa na ufikie azimio (R) zaidi ya 1.5

l Amua uthabiti (usafi) wa kilele cha chromatografia cha vifaa vilivyojaribiwa.

l Kuamua kikomo cha kugundua na kikomo cha quantification ya njia;unyeti na safu ya mstari

2. Weka curve ya urekebishaji na sampuli za kawaida za viwango tofauti

3. Angalia usahihi na usahihi wa mbinu za kiasi

4. Tumia programu inayolingana ya usimamizi wa kromatografia kutekeleza ukusanyaji wa sampuli, usindikaji wa data na matokeo ya ripoti

SEHEMU
05 Utambulisho wa kilele cha kiasi (ubora)

Tambua kwa ubora kila kilele cha kromatografia kitakachohesabiwa

Kwanza, tumia sampuli ya kawaida kubainisha muda wa kuhifadhi (Rt) wa kilele cha kromatografia ili kuhesabiwa.Kwa kulinganisha muda wa kuhifadhi, tafuta kijenzi kinacholingana na kila kilele cha kromatografia katika sampuli isiyojulikana.Mbinu ya ubora wa kromatografia ni kulinganisha muda wa kubaki na sampuli ya kawaida.Kigezo hakitoshiuthibitisho zaidi (ubora)

1. Mbinu ya kuongeza kiwango

2. Tumia mbinu zingine kwa wakati mmoja: mbinu zingine za kromatografia (kubadilisha utaratibu, kama vile: kutumia safu wima tofauti za kromatografia), vigunduzi vingine (PDA: ulinganisho wa wigo, utafutaji wa maktaba ya wigo; MS: uchanganuzi wa masafa mengi, utafutaji wa maktaba ya wigo)

3. Vyombo vingine na mbinu

SEHEMU
06 Uthibitisho wa Uthabiti wa Kilele cha Kiasi

Thibitisha uthabiti wa kilele cha kromatografia (usafi)

Hakikisha kuwa kuna kipengele kimoja tu kilichopimwa chini ya kila kilele cha kromatografia

Angalia ikiwa kuna mwingiliano kutoka kwa dutu zinazojumuisha (uchafu)

Mbinu za Uthibitishaji wa Uthabiti wa Kilele cha Chromatographic (Usafi)

Kulinganisha Spectrograms na Vigunduzi vya Photodiode Matrix (PDA).

Kitambulisho cha Usafi wa kilele

Nadharia ya Pembe ya Usafi ya 2996

Mbinu za kiasi zinazotumiwa sana katika SEHEMU YA 07

Njia ya kawaida ya curve, imegawanywa katika njia ya kawaida ya nje na njia ya ndani ya kawaida:

1. Mbinu ya kiwango cha nje: hutumika zaidi katika kromatografia ya kioevu

Msururu wa sampuli za viwango vya viwango vinavyojulikana zilitayarishwa kwa kutumia sampuli safi za misombo ya kujaribiwa kama sampuli za kawaida.hudungwa kwenye safu hadi thamani yake ya majibu (eneo la kilele).
Ndani ya masafa fulani, kuna uhusiano mzuri wa mstari kati ya mkusanyiko wa sampuli ya kawaida na thamani ya majibu, yaani W= f×A , na curve ya kawaida hufanywa.

Chini ya hali sawa za majaribio, weka sampuli isiyojulikana ili kupata thamani ya majibu ya kijenzi kitakachopimwa .Kwa mujibu wa mgawo unaojulikana f, mkusanyiko wa sehemu ya kupimwa inaweza kupatikana.

Faida za njia ya kawaida ya nje:operesheni rahisi na hesabu, ni njia ya kawaida ya upimaji;hakuna haja ya kila sehemu kugunduliwa na kutolewa;sampuli ya kawaida inahitajika;hali ya kipimo cha sampuli ya kawaida na sampuli isiyojulikana inapaswa kuwa thabiti;kiasi cha sindano kinapaswa kuwa sahihi.

Ubaya wa njia ya kawaida ya nje:Masharti ya majaribio yanahitajika kuwa ya juu, kama vile unyeti wa detector, kiwango cha mtiririko, na muundo wa awamu ya simu haiwezi kubadilishwa;kiasi cha kila sindano kinapaswa kuwa na kurudiwa vizuri.

2. Mbinu ya kiwango cha ndani: sahihi, lakini yenye shida, inayotumiwa zaidi katika njia za kawaida

Kiasi kinachojulikana cha kiwango cha ndani kinaongezwa kwa kiwango cha kufanya kiwango cha mchanganyiko, na mfululizo wa viwango vya kazi vya mkusanyiko unaojulikana huandaliwa.Uwiano wa molar wa kiwango kwa kiwango cha ndani katika kiwango cha mchanganyiko bado haujabadilika.Ingiza kwenye safu wima ya kromatografia na uchukue (sehemu ya kawaida ya kilele cha eneo/ eneo la kilele la sampuli ya kawaida) kama thamani ya majibu.Kulingana na uhusiano wa mstari kati ya thamani ya majibu na mkusanyiko wa kiwango cha kufanya kazi, yaani W= f×A, curve ya kawaida hufanywa.

Kiasi kinachojulikana cha kiwango cha ndani huongezwa kwenye sampuli isiyojulikana na kuingizwa kwenye safuwima ili kupata thamani ya majibu ya kijenzi kitakachopimwa .Kwa mujibu wa mgawo unaojulikana f, mkusanyiko wa sehemu ya kupimwa inaweza kupatikana.

Tabia za njia ya kawaida ya ndani:Wakati wa operesheni, sampuli na kiwango cha ndani huchanganywa pamoja na kuingizwa kwenye safu ya chromatografia, ili mradi uwiano wa kiasi cha sehemu iliyopimwa na kiwango cha ndani katika suluhisho mchanganyiko ni mara kwa mara, mabadiliko ya kiasi cha sampuli. haitaathiri matokeo ya kiasi..Njia ya ndani ya kiwango hupunguza ushawishi wa kiasi cha sampuli , na hata awamu ya simu na detector, hivyo ni sahihi zaidi kuliko njia ya kawaida ya nje.

SEHEMU
Mambo 08 yanayoathiri Matokeo ya Uchambuzi wa Kiasi

Usahihi mbaya unaweza kusababishwa na:

Muunganisho usio sahihi wa eneo la kilele, mtengano wa sampuli au uchafu ulioletwa wakati wa utayarishaji wa sampuli, bakuli la sampuli halijafungwa, sampuli au kuyeyusha viyeyusho, utayarishaji usio sahihi wa sampuli, matatizo ya sampuli ya sindano, utayarishaji usio sahihi wa kiwango cha ndani.

Sababu zinazowezekana za usahihi mbaya:

Muunganisho wa kilele usio sahihi, shida za sindano au kidunga, mtengano wa sampuli au uchafu unaoletwa wakati wa utayarishaji wa sampuli, shida za kromatografia, mwitikio duni wa kigunduzi.